Como fazer a contagem de células em câmara de neubauer nas cervejarias
Muitas vezes acreditamos que implementar rotinas de controle de qualidade no nosso dia a dia fabril deve ser caro e cabe somente a grandes empresas como, por exemplo, a contagem de células em câmara de neubauer. Metodologias simples que irão te auxiliar e que são super acessíveis.
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Neste conteúdo vou compartilhar com você esta técnica de baixo custo de contagem de células em câmara de neubauer que trará benefícios para suas fermentações e consequentemente para sua cerveja. Confira!
Quais são os equipamentos necessários?
Para fazer a contagem de células em câmara de neubauer nas cervejarias é necessário contar com os seguintes equipamentos:
- microscópio com objetiva de 40 vezes;
- câmara de Neubauer;
- tubos de ensaio;
- becker;
- agitador e barra magnética;
- balança;
- azul de metileno.
Foto: Banco imagens Levteck
Como fazer a diluição?
Primeiramente precisamos identificar a origem da nossa levedura, pois para cada fonte de levedura serão aplicadas diferentes diluições. Abaixo você pode conferir a diluição sugerida para cada fonte de levedura:
- propagação de leveduras – diluição de 2 a 20X;
- fermentação (para verificar se iniciou de maneira adequada) – diluição de 2 a 20X;
- biomassa de reuso – diluição de 100 a 200X.
Para realizar o procedimento, vamos precisar da balança e do agitador magnético. É importante coletar a fração do meio do cone onde há a certeza que não há células mortas ter uma biomassa homogênea.
Qual o passo a passo para fazer a diluição?
A partir dessa fração, vamos pesar 1 g de biomassa com 99 gramas de água. Quando fizemos esse procedimento, tivemos uma diluição de 100 vezes. Posteriormente, levamos para o agitador magnético e deixamos homogeneizado de 3 a 5 minutos.
Passado esse tempo, chegou o momento de misturar a levedura diluída com o azul de metileno (corante que indica células mortas). As células de coloração azul são consideradas mortas e as incolores são consideradas vivas.
Para isso, vamos pesar 1 grama da nossa levedura previamente diluída 100 vezes, com 1 grama de azul de metileno. Essa prática, vai transformar a diluição prévia para 200 vezes. Desse modo, o primeiro passo para fazer a contagem correta é conhecer as diluições.
Na sequência é importante homogeneizar a amostra e colocá-la na câmara de Neubauer, levando a câmera ao microscópio e visualizando as leveduras na objetiva de 40X. A câmara é dividida por quadrantes e vamos usar o central. Nesta parte, iremos contar 5 quadrantes, usando uma diagonal.
Dentro de um quadrante de contagem, há 16 quadrículos que nos guiam dentro do quadrante , evitando a contagem dupla. Contamos todas as leveduras vivas e mortas de cada um dos 5 quadrantes indicados na área de contagem.
A área tem 1mm² e uma altura de 0,1 mm, totalizando 0,1 mm³. Por meio dessa informação podemos fazer o cálculo das leveduras.
Como fazer a contagem de leveduras?
Para saber a quantidade total de leveduras basta utilizar a seguinte fórmula:
- Total de leveduras x 5 x fator de diluição x 10.000 (volume em mL)
Para quantificar a viabilidade celular utilizamos o cálculo abaixo:
- Células vivas/ número total de leveduras * 100
Sobre esse tema é importante mencionarmos que só utilizamos biomassa de levedura com viabilidade acima de 6%.
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