Análises microbiológicas após CIP (água de enxágue e superfícies)

Vamos apresentar o método de coleta de água de forma asséptica e a técnica de filtração em membrana. 

Essa metodologia é utilizada na validação do CIP, na avaliação microbiológica da água e na avaliação de cervejas no envase ou finalizadas. Assista ao vídeo para saber mais:

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Quais são os equipamentos necessários?

Para realizar a coleta de água de forma asséptica utilizamos os seguintes materiais: 

• frasco esterilizado;
• álcool 70%;
• maçarico;
• gaze ou algodão.

Após a limpeza do tanque com detergente alcalino, devemos validar a limpeza utilizando a água de enxágue após a soda. É importante realizar o teste de fenolftaleína para não haver resíduos de soda. No último momento de enxágue, colete a água pela válvula do fundo em um recipiente esterilizado e realize a técnica de filtração em membrana.

Assim, você terá uma amostragem mais representativa do estado microbiano do seu tanque, validando a eficiência do seu CIP e diminuindo as chances de contaminação do seu produto.

Foto: Banco imagens Levteck

Como garantir que a amostra não seja contaminada?

Para garantir que a amostra não seja contaminada durante a coleta é importante seguir alguns passos:

• borrife álcool na saída da válvula de amostragem;
• higienize com swab, gaze ou algodão;
• borrife álcool novamente;
• flambe utilizando um maçarico.

O próximo passo é descartar a amostra por 30 segundos para esfriar a torneira. Isso porque, a alta temperatura pode eliminar os microrganismos da amostra. 

Na sequência, coletamos 1,5 litro de água em um recipiente esterilizado. É importante pontuar que a amostra deve ser rapidamente analisada.

Como funciona a técnica de filtração em membrana?

Essa técnica possibilita a análise de um grande volume de amostra, concentrando os microorganismos na superfície de uma membrana. Vamos precisar dos seguintes materiais:

• bomba a vácuo;
• sistema de filtração a vácuo;
• membrana de nitrocelulose estéril 47mm;
• pinça;
• bico de bunsen;
• meios de cultura (TeckBac, TeckLev, Mac Conkey e MRS);
• incubadora microbiológica.

A técnica é utilizada para validar o CIP e o estado microbiológico do produto. Cervejas mais lupuladas, escuras ou que contém células em suspensão são mais difíceis de aplicar essa metodologia, pois saturam a membrana não filtrando uma quantidade de amostra significativa. 

Para validação de CIP, a técnica é mais significativa, pois em tanques grandes, não conseguimos alcançar os pontos críticos somente com swab, desse modo, recomendamos que seja feita uma filtração em membrana da água de enxágue.

Para filtrar a amostra, insira de forma asséptica a membrana no suporte e acople o copo de amostra. Junte o copo coletor e certifique-se que tudo esteja bem encaixado.

Coloque a amostra no copo coletor e conecte o sistema na bomba a vácuo. Na sequência é só ligar a bomba e aguardar a filtração. Remova a membrana de forma asséptica e coloque na superfície do meio de cultura, evitando a formação de bolhas. Repita o mesmo procedimento para todos os meios de cultura que irá utilizar.

Como analisar água de enxágue?

Para esse procedimento recomendamos o uso dos meios:

• TeckBac para bactérias totais;
• TeckLev #3 para leveduras totais;
• MacConkey para enterobactérias.

Caso você utilize essa técnica para a análise de cervejas, recomendamos a utilização de umas gotas de antiespumante no copo coletor, a fim de evitar a formação de espuma.

Para análise de cervejas, utilize os meios:

• TeckBac para bactérias totais;
• TeckLev #6 para leveduras contaminantes;
• MRS para bactérias láticas.

Incubar as placas com a membrana em estufa microbiológica por até 6 dias e analisar o crescimento na superfície da membrana.

Importante destacar que se houver crescimento fora da área membrana, indica contaminação da técnica e ela não pode ser validada.

A Levteck desenvolveu kits para a realização de controle microbiológico fácil e descomplicado. Utilizando a técnica de filtração de membrana, você poderá analisar a sua cerveja e o estado microbiológico. Consulte nossos kits no nosso site.